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（1）外周血单个核细胞的分离

外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。常用的分层液有Ficoll与Percoll两种。

（2）淋巴细胞的分离

1）纯淋巴细胞群的采集：利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。主要的方法有：①粘附贴壁法；②吸附柱过滤法；③磁铁吸引法。

2）淋巴细胞亚群的分离原则：选择纯化所需细胞的方法是阳性选择法，而选择性去除不要的细胞，仅留下所需的细胞为阴性选择法。常用的方法包括：①E花环沉降法；②尼龙毛柱分离法；③亲和板结合分离法；④磁性微球分离法及荧光激活细胞分离仪分离法。

（3）淋巴细胞的保存与活力测定

①短期保存技术：短期保存可置于4℃保存。

②长期保存技术：液氮深低温（-196℃）环境保存细胞，加入二甲亚砜作为保护剂。

③活力测定：最简便常用的为台盼蓝染色法，呈蓝色。